质粒中“氨苄青霉素抗性基因”的作用是                                                                。研究发现复制原点处的$\rm A$和$\rm T$特别多，有利于$\rm DNA$复制时                过程的发生。

鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞（供重组$\\rm DNA$的鉴定和选择）；解旋

氨苄青霉素抗性基因属于标记基因，质粒中标记基因的作用都是便于筛选目的基因是否导入受体细胞。$\rm A-T$ 碱基对之间形成两个氢键， $\rm C-G$ 碱基对之间形成三个氢键，研究发现复制原点处的$\rm A$和$\rm T$特别多说明氢键较少，便于解旋过程的发生。

限制酶$Bam\rm H$Ⅰ的识别序列和切割位点是$\rm G↓GATCC$，该酶切形成的黏性末端是                。

或

限制酶$ Bam\rm H$Ⅰ的识别序列和切割位点是$\rm G↓GATCC$，则该酶切割 $\rm DNA$ 后形成的黏性末端是 或 。

已知图中质粒经$Bam\rm H$Ⅰ、$Hin\rm d$Ⅲ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为$\rm 5300\;bp$的$\rm DNA$条带，则重组质粒的长度为                 的$\rm DNA$片段条带。

根据题意可知，绿色荧光蛋白基因有$\rm 720$个碱基对$(\rm bp )$，质粒有$\rm 5369$个碱基对$\rm (bp )$，质粒经$Bam\rm H$Ⅰ、 $Hin\rm d$Ⅲ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为$\rm 5300\;bp$的 $\rm DNA$ 条带，说明$\rm 5300\;bp$的 $\rm DNA$ 条带是原质粒中切去部分片段的质粒；重组质粒的长度$\rm =5300+720=6020\;kb$。

过程①用两种限制酶切割质粒，与单一酶切相比，其优势有                                                                。过程②通过$\rm PCR$技术实现，进行$\rm PCR$时，需要在两种引物的                端分别添加$Bam\rm H$Ⅰ和$Hin\rm d$Ⅲ的识别序列。

可以避免目的基因和质粒自身环化，可使目的基因定向插入到质粒中（可以避免目的基因和质粒自身环化，可避免目的基因与质粒反向连接）；$\\rm 5'$

用同一种酶切割目的基因和质粒，可形成相同的黏性末端，在质粒和目的基因连接的时候可能出现反向连接，目的基因和质粒也能出现自身环化的可能性；故用两种限制酶切割质粒，与单一酶切相比，可以避免目的基因和质粒自身环化，可使目的基因定向插入到质粒中（可以避免目的基因和质粒自身环化，可避免目的基因与质粒反向连接）。$\rm DNA$聚合酶从引物的$\rm 3'$端延伸子链，故进行 $\rm PCR$时，需要在两种引物的$\rm 5'$端分别添加 $Bam\rm H$Ⅰ和 $Hin\rm d$Ⅲ的识别序列，以确保扩增所得的$\rm DNA$可以被正确切割。

将重组质粒导入大肠杆菌前，要用$\rm CaCl_{2}$处理大肠杆菌，其目的是                                                                ；进行筛选时，大肠杆菌培养基中除需要加入水、无机盐、碳源、氮源、琼脂等物质外，还要分别添加                。

使大肠杆菌处于感受态（或处于容易吸收$\\rm DNA$的状态）；四环素、氨苄青霉素

$\rm CaCl_{2}$处理大肠杆菌后，大肠杆菌会处于容易吸收 $\rm DNA$ 的状态，也即是处于感受态。图中的标记基因有四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因，四环素抗性基因已经被破坏，大肠杆菌培养基中除需要加入水、无机盐、碳源、氮源、琼脂等物质外，还要分别添加四环素、氨苄青霉素，选择氨苄青霉素而不抗四环素的菌株，即为需要的目的菌株。