利用外源$\rm DNA$、质粒制备含$\rm CD47$基因的重组质粒。如图为含$\rm CD47$基因的外源$\rm DNA$、质粒的有关信息，$ Eco\rm R$Ⅰ、$Bam\rm H$Ⅰ、$Sal$Ⅰ、$Xho$Ⅰ均为限制酶，$\rm Kan'$、$\rm Tc'$分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。

①为了形成合适的重组质粒，应该选用$Bam\rm H$Ⅰ、$Xho$Ⅰ限制酶切割外源$\rm DNA$和质粒$\rm DNA$，原因是：$\rm a$、                ；$\rm b$、                。

②重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图所获得的重组质粒分析，所选受体细胞应具备                                                                条件。

能将目的基因完整切割；只破坏一个标记基因；能在含卡那霉素的培养基上生长而不能在含四环素的培养基上生长

①$\rm CD47$基因为目的基因，其中含有限制酶$Sal$Ⅰ的识别序列和切割位点，因此获取目的基因时不能用限制酶$Sal$Ⅰ进行切割；为了防止目的基因和运载体切割后自身环化或不定向连接，应该选用两种限制酶进行切割，可以选择限制酶$ Bam\rm H$ Ⅰ和$Xho$ Ⅰ或限制酶$Eco\rm R$ Ⅰ和$Xho$Ⅰ，若选择限制酶$Eco\rm R$Ⅰ和$Xho$ Ⅰ会破坏质粒上的两个标记基因，因此不能选用该组限制酶，应该选用限制酶$Bam\rm H$ Ⅰ和$Xho$Ⅰ。

②由于限制酶$Xho$Ⅰ将$\rm Tc^\prime$基因破坏，而$\rm Kan^\prime$没有被破坏，所以受体细胞应具备能在含卡那霉素的培养基上生长而不能在含四环素的培养基上生长。

如图是利用上述基因工程获得的$\rm CD47$蛋白制备相应单克隆抗体及相关治疗效果检测实验过程。

①图中获得细胞$\rm A$的器官通常是                。

②图中过程$\rm b$可以采用的方法有                                                                。（答出一点）

③图中“筛选”一般需要进行两次，目的依次是：第一次                ，第二次                                                                。

④如图中共同培养吞噬细胞和肿瘤细胞，在实验组加入不同浓度的$\rm CD47$抗体，测定吞噬细胞的吞噬指数（吞噬指数与吞噬细胞所吞噬的肿瘤细胞数量成正相关），实验结果如图所示。该实验结果对临床治疗肿瘤有何指导意义？                                                                。

脾脏；物理方法（离心法、电融合法）、化学方法$\\rm [$聚乙二醇（$\\rm PEG$）融合法$\\rm ]$、灭活病毒诱导法；筛选出杂交瘤细胞；筛选出既能无限增殖又能产生抗$\\rm CD47$蛋白抗体的杂交瘤细胞；使用$\\rm CD47$抗体治疗肿瘤需要严格控制抗体的浓度

①$\rm a$是将$\rm CD47$蛋白注入小鼠体内，目的是要获得已免疫的$\rm B$淋巴细胞，能够产生对$\rm CD47$有抗性的抗体，细胞$\rm A$是$\rm B$细胞，$\rm B$细胞可以从脾脏中获得，因此获得细胞$\rm A$的器官通常是脾脏。

②$\rm b$是将$\rm B$细胞和骨髓瘤细胞融合，常采用的方法有物理方法（离心法、电融合法）、化学方法[聚乙二醇（$\rm PEG$）融合法]、灭活病毒诱导法。

③图中“筛选”的目的是选择出既能无限增殖又能产生抗$\rm CD47$蛋白抗体的杂交瘤细胞，采用的方法一是先用特定的选择培养基筛选，将未融合的亲本细胞和融合具有同种核的细胞淘汰，二是对杂交瘤细胞进行抗体检测，所以采用了$\rm 2$种方法。

④从题图中看出，随着$\rm CD47$抗体浓度的增加，在低于$\rm 25\;\rm \mu g/mL$时，与对照相同，而达到$\rm 50\;\rm \mu g/mL$时，吞噬指数大幅增加，所以使用$\rm CD47$抗体治疗肿瘤需要严格控制抗体的浓度。