获取$\rm hLZ$基因后构建重组质粒常用到                酶。为了保证$\rm hLZ$基因在山羊乳腺中表达，构建基因表达载体时需注意的问题是                                                                。

限制酶和$\\rm DNA$连接酶；将$\\rm hLA$基因与乳腺中特异性表达的启动子等调控原件重组在一起

为了获取$\rm hLZ$基因后构建重组质粒常用到限制酶和$\rm DNA$连接酶，在构建基因表达载体时，需要将人溶菌酶（$\rm hLZ$）基因和乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这样才能使目的基因只在乳腺组织中表达。

胚胎工程最终的技术环节是过程                （填序号），其实质是                                                                。

④；早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移

分割后的胚胎需经④胚胎移植才能发育成新个体，且胚胎移植前对供体和受体进行了同期发情处理，因此，胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，代孕母牛一般具有健康的体质和正常的繁殖能力。

在进行过程④之前，必须获取囊胚的滋养层进行                ，为了获得更多的乳腺生物反应器，可在该时期进行胚胎分割，分割时应注意                                                                。

鉴定性别；将内细胞团均等分割

科学家将人溶菌酶（$\rm hLZ$）基因导入山羊体内使其能够在山羊乳腺细胞中表达，从山羊乳汁中提取人溶菌酶，因此在进行过程④胚胎移植之前，必须获取囊胚的滋养层进行鉴定性别，为了获得更多的乳腺生物反应器，可在该时期进行胚胎分割，分割时应注意将内细胞团均等分割。

为探究冷冻胚胎分割前培养时间对分割后胚胎发育率的影响，每组取$\rm 60$枚同种冷冻胚胎，分别在解冻后培养$\rm 0$、$\rm 15$、$\rm 30$、$\rm 45$、$\rm 60$、$\rm 90$、$\rm 120\;\rm min$进行分割，将各组半胚和对照组整胚用培养液培养$\rm 24\;\rm h$，统计胚胎发育率，结果见表。

冷冻胚胎分割前培养时间对胚胎发育率的影响

由表中数据可知，分割造成的损伤会降低胚胎发育率，判断的依据是                                                                ；冷冻胚胎分割前最优培养时间大约是                分钟。

分割后的胚胎发育率均低于整胚的发育率；$\\rm 45$

由表中数据可知，各组半胚的胚胎发育率无论在解冻后培养多长时间均低于对照组整胚的胚胎发育率，因而可得出结论：分割造成的损伤会降低胚胎发育率，结合表格数据可知，冷冻胚胎分割前最优培养时间大约是$\rm 45$分钟左右，因为该时段分割半胚的胚胎发育率最高，最接近对照组。