研究发现$\rm CRISPR -Cas9$系统广泛存在于细菌细胞内，推测该系统在细菌细胞内的作用是                                                                。$\rm CRISPR-Cas$系统中 $\rm Cas9$蛋白具有内切酶活性，水解目标 $\rm DNA$ 的                填化学键）。

切割外源$\\rm DNA$，保护自身；磷酸二酯键

$\rm CRISPR/Cas9$系统广存在于细菌细胞中，推测该系统在细菌细胞内的作用是切制外源$\rm DNA$，防止外源基因插入并表达，保护自身，保证了细菌遗传性状的稳定。$\rm CRISPR - Cas9$系统中 $\rm Cas9$蛋白具有内切酶活性，通过切割$\rm DNA$双链以敲除目标基因或插入新的基因，故功能类似于限制性内切酶，将$\rm DNA$中的磷酸二酯键破坏。

实验中利用脂质体能实现基因转移的原理                                                                。$\rm 24\; h$后在培养皿中添加                                                                筛选并进行单细胞培养，经检测后即可得到基因编辑后的细胞。此过程须在$\rm 37^\circ\rm C$，气体环境为$\rm 95\%$空气$\rm +5\%\;CO_{2}$的（填装置）中进行。

生物膜具有一定的流动性；抗生素$\\rm G418$和嘌呤霉素

包埋$\rm DNA$的脂质体结构能与细胞实现融合，能实现基因转移的原理是生物膜具有一定的流动性，由于该质粒上具有$\rm G418$抗性基因和嘌呤霉素抗性基因，故$\rm 24\;\rm h$后可通过添加抗生素$\rm G418$和嘌呤霉素筛选并进行单细胞培养即可得到基因编辑成功后的细胞。动物细胞培养的气体环境为$\rm 95\%$空气加$\rm 5\%CO_{2}$的混合气体的细胞培养箱。

转染好的细胞用裂解液消化后，使用$\rm RNA$提取试剂盒提取总$\rm RNA$，使用反转试剂盒进行逆转录，最终得到                 ，再进行$\rm PCR$。进行$\rm PCR$时，$\rm a$个双链$\rm DNA$经过$\rm n$轮扩增，理论上至少需要的引物数量为                 。

反转录试剂盒以提取的总$\rm RNA$作为模板，根据碱基互补配对原则合成其互补$\rm DNA$即$\rm cDNA$。$\rm DNA$复制时，每个$\rm DNA$的两条模板链需要两种不同的引物，由此可知，进行$\rm n$次$\rm DNA$复制，第一次需要$\rm 2$个，第二次需要$\rm 4$个，第三次需要$\rm 8$个$\rm \cdots$第$\rm n$次需要$\rm 2^{n}$个，则一共需要$(\rm 2+4+8\cdots\rm +2^{n})=(2^{n+1}-2)$个。而$\rm a$个双链$\rm DNA$经过$\rm n$轮扩增，理论上至少需要的引物数量为$(\rm 2^{n+1}-2)\rm a$个。