一个基因进行转录之前，首先需要$\rm RNA$聚合酶识别启动子，$\rm Ipp20$基因的启动子应该位于图甲的                 （填“非编码区$\rm 1$”“编码区”或“非编码区$\rm 2$”）。

在真核细胞的基因结构中，包括编码区和非编码区，其中编码区又分为外显子和内含子，基因的非编码区存在启动子和终止子，启动子和终止子都是一段特殊的$\rm DNA$序列，属于基因的非编码区，分别位于编码区的上游和下游，所以$\rm Ipp20$基因的启动子应该位于图甲的非编码区$\rm 1$。

通过$\rm PCR$技术可以大量获取$\rm Ipp20$基因的编码区序列，请根据图甲设计一对合适的引物                （书写方向为$\rm 5'-3'$，写出$\rm 5'$端$\rm 6$个碱基即可）。据图甲、乙、丙分析，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是                ，最适合用作载体的质粒是                。

$\\rm 5'-CTCGAG-3'$、$\\rm 5'-TCTAGA-3'$；$Xba$ Ⅰ、$Xho$ Ⅰ；质粒乙

根据题干信息“图甲是$\rm Ipp20$基因的编码链（编码链为转录时所用模板链的互补链）”可知：通过$\rm PCR$技术可以大量获取$\rm Ipp20$基因的编码区序列时，设计引物序列的主要依据是过敏基因编码区两端的部分核苷酸序列，按照碱基互补配对原则，与已知链对应的引物序列应为$\rm 5'-CTCGAG-3'$和$\rm 5'-TCTAGA-3'$。对应的限制酶为$Xba$ Ⅰ、$Xho$ Ⅰ。质粒乙上$Xba$ Ⅰ、$Xho$ Ⅰ酶切位点位于启动子和终止子之间，$ Xho$ Ⅰ和$Xba$ Ⅰ酶切后的黏性末端不同，可避免质粒的自身环化和随意连接，故质粒乙是适合做载体的质粒。

构建基因表达载体时，如果只有下图所示的质粒丙可用，为了确保$\rm Ipp20$基因编码区序列正确插入载体，需要将$\rm PCR$过程中使用的引物进行改造，请写出新的引物设计方案                                                                。

将引物$\\rm 5'-CTCGAG\\cdots-3'$的$\\rm 5'$端加上$\\rm Pst$ Ⅰ的识别序列

构建基因表达载体时，如果只有质粒丙可用，可以使用$\rm Pst$ Ⅰ和$\rm Xba$ Ⅰ切割质粒，为了确保$\rm Ipp20$基因编码区序列正确插入载体，需要将$\rm PCR$过程中使用的引物进行改造，由题图分析可知：目的基因上没有$\rm Pst$ Ⅰ的识别序列，所以新的引物设计方案是：将引物$\rm 5'-CTCGAG\cdots-3'$的$\rm 5'$端加上$\rm Pst$ Ⅰ的识别序列。

利用质粒丙成功构建了基因表达载体，且对大肠杆菌做了转化处理。为筛选出含有目的基因的大肠杆菌，可将大肠杆菌先接种到含                 的$\rm 1$号固体培养基上，再将$\rm 1$号培养基上的菌落“原位接种”到含                 的$\rm 2$号培养基上，最终$\rm 2$号培养基上                 （填“存活的”或“消失的”）菌落就是含目的基因的大肠杆菌。

利用质粒丙成功构建了基因表达载体，说明质粒四环素抗性基因被破坏，仅保留一个青霉素抗性基因，即含有重组质粒的大肠杆菌能在含有青霉素的培养基上生长，但不能在含有四环素的培养基上生长，为筛选出含有目的基因的大肠杆菌，可将大肠杆菌先接种到含青霉素的$\rm 1$号固体培养基上，再将$\rm 1$号培养基上的菌落“原位接种”到含四环素的$\rm 2$号培养基上，最终$\rm 2$号培养基上消失的菌落就是含目的基因的大肠杆菌。