对于$\rm PEDV$而言，基因指的是                                  。$\rm PEDV$在细胞中的增殖过程如图$\rm 1$所示。$\rm PEDV$感染细胞后，其基因组既可作为                翻译出病毒特异的蛋白质，又能够作为模板经过                次复制得到子代病毒的基因组。

有遗传效应的$\\rm RNA$片段；$\\rm mRNA$；$\\rm 2$

基因是生物体遗传的基本单位，通常是有遗传效应的$\rm DNA$片段，$\rm PEDV$是一种正链单股$\rm RNA$病毒，因此它的基因为有遗传效应的$\rm RNA$片段，分析图可知$\rm PEDV$感染细胞后，其基因组既可作为$\rm mRNA$翻译出病毒特异的蛋白质，又能够作为模板经过复制得到子代病毒的基因组，因为$\rm PEDV$是一种正链单股$\rm RNA$病毒，因此需要$\rm 2$次复制才得到子代病毒的基因组。

$\rm Nsp10$基因不能直接进行$\rm PCR$扩增，需要经                过程得到相应的产物再进行$\rm PCR$扩增。为了便于扩增后的$\rm DNA$片段与表达载体连接，需在引物的                （填“$\rm 3$'端”或“$\rm 5$'端”）加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是                                                  。

逆转录；$\\rm 5$'端；保证扩增后的$\\rm DNA$片段与表达载体正向连接

$\rm Nsp10$基因是$\rm RNA$，不能直接进行$\rm PCR$扩增，需要经逆转录过程得到相应的产物再进行$\rm PCR$扩增。由于$\rm DNA$子链是从引物的$\rm 3$’端延伸，而且引物的$\rm 3$’端序列必须与模板链配对，因此在设计引物时，只能在两条引物的$\rm 5$’端加上限制性酶切位点，常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，保证扩增后的$\rm DNA$片段与表达载体正向连接。

扩增$\rm Nsp10$基因的特异性引物分别为：

引物Ⅰ序列：$\rm 5$'$\rm -GCCATGGAGGCCCGAATTCGGATGGCTGGT-3$'，

引物Ⅱ序列：$\rm 5$'$\rm -CGCGGCCGCGGTACCTCGAGATTGCATAAT-3$'

下表为几种限制酶的识别序列及其切割位点，图$\rm 2$质粒上的，$\rm Amp^{r}$代表青霉素抗性基因，其作用是                                  ，$\rm orl$为复制原点，其余为限制酶切割位点，由此推断切割质粒选择的限制酶是                。

便于重组$\\rm DNA$分子的筛选；$Eco$$\\rm R$Ⅰ、$ Xho$Ⅰ

$\rm Amp^{r}$代表青霉素抗性基因，在基因表达载体中作为标记基因存在，便于重组$\rm DNA$分子的筛选。扩增$\rm Nsp10$基因的特异性引物分别为： 引物Ⅰ序列：$\rm 5$'$\rm -GCCATGGAGGCCCGAATTCGGATGGCTGGT-3$'，  引物Ⅱ序列：$\rm 5$'$\rm -CGCGGCCGCGGTACCTCGAGATTGCATAAT-3$'，两种引物上分别有$Eco$$\rm R$Ⅰ、$Xho$Ⅰ的识别序列，由此推断切割质粒选择的限制酶是$Eco$$\rm R$Ⅰ、$Xho$Ⅰ。