利用$\rm PCR$ 技术可以实现在体外快速大量进行$\rm DNA$扩增，其需要的物质条件为：$\rm DNA$ 模板、$\rm 4$种脱氧核苷酸、                 和                 。

$\rm PCR$技术的原理是$\rm DNA$双链复制，利用$\rm PCR$ 技术可以实现在体外快速大量进行$\rm DNA$扩增，其需要的物质条件为：$\rm DNA$ 模板、$\rm 4$种脱氧核苷酸、引物（使得$\rm DNA$聚合酶能从引物的$\rm 3^\prime$端开始连接脱氧核苷酸）、耐高温的$\rm DNA$聚合酶。

$\rm PCR3$不需要引物，高温加热后$\rm fat1——2A$和$\rm 2A——fat2$的双链解开，其中能正常延伸形成融合基因的是                 （填序号）形成的杂交链。

若融合基因以$\rm a$链作为模板链，即$\rm a$链的启动子所处的一端为$\rm 3$’端，由于引物丁与④号链互补，即引物丁与$\rm CS$基因的$\rm 3$’端互补，这与融合基因中引物$\rm F3$的大部分序列相同，由于引物丁还包含$\rm 2A$基因的部分序列，与引物$\rm R4$的部分序列相同。进行$\rm PCR3$过程不需要引物，高温变性后双链解开，其中②、③结合形成的杂交链不能延伸形成融合基因$\rm PD—2A—CS$，只有①、④结合形成的杂交链能延伸形成融合基因，因为②、③结合形成的杂交链的缺口处是$\rm 5$’端，不能自动延伸。

图乙所示基因在转录时应以                 链为模板，为了确定 $\rm fat1$基因连接到质粒中且插入$\rm 2A$序列的上游，需进行$\rm PCR$ 检测，若仅用一对引物，应选择图乙中的引物                 。

为增加某油料作物种子中多不饱和脂肪酸含量，研究人员将该融合基因（命名为$\rm D$）转入$\rm Ti$质粒（图丙）形成基因表达载体，将基因表达载体导入农杆菌，应用农杆菌转化法（图丁），最终获得多不饱和脂肪酸含量较高的转基因作物品种。

图丙

图丁

根据启动子的位置和引物的方向可知图乙所示基因在转录时应以$\rm a$链为模板，为了确定$\rm fatl$基因连接到质粒中且插入$\rm 2A$序列的上游，需进行$\rm PCR$检测，若仅用一对引物，应选择图乙中的引物$\rm F1$、$\rm R3$ 。

$\rm Ti$ 质粒部分片段如图丙所示，为使融合基因$\rm D$成功与$\rm Ti$ 质粒构建表达载体，$\rm PCR$ 时需要在图乙引物                 的$\rm 5$’端添加限制酶                 的识别位点，并在引物                 的$\rm 5$’端添加限制酶                 的识别位点。

为使目的基因能够正常表达，目的基因应位于启动子和终止子之间，结合图丙和乙可知，$\rm Ti$ 质粒部分片段如图丙所示，为使融合基因$\rm D$成功与$\rm Ti$ 质粒构建表达载体，$\rm PCR$ 时需要在图乙引物$\rm F1$的$\rm 5$’端添加限制酶$Xba$Ⅰ的识别位点，并在引物$\rm R2$的$\rm 5$’端添加限制酶$ Sac$Ⅰ的识别位点。

为了获得含有基因表达载体的农杆菌，从功能角度来说，需使用含有抗生素的                 培养基进行筛选，将筛选出的农杆菌浸泡过的作物愈伤组织，进行植物组织培养，从外植体培养成试管苗需要用                 种培养基。

为了获得含有基因表达载体的农杆菌，从功能角度来说，需使用含有抗生素的选择培养基进行筛选（使得含有目的基因的植株能存活），将筛选出的农杆菌浸泡过的作物愈伤组织，进行植物组织培养，从外植体培养成试管苗需要用$\rm 3$种培养基（诱导愈伤组织的形成、诱导芽的分化、诱导根的分化）。

为研究转化过程中酶$\rm D$基因插入染色体位点情况，研究者筛选出转基因植株，成熟后自花传粉、单株收种，将其种子播种于含潮霉素的选择培养基中（图丁），若种子萌发率为$\rm 15/16$，请在下图细胞中画出转基因植株酶 $\rm D$ 基因（用$\rm D$表示）在染色体的位置。                

如果含两个酶$\rm D$基因，且位于非同源染色体上，相当于两对基因杂合，符合基因自由组合定律，则子代有$\rm 15/16$种子含酶$\rm D$基因可以萌发，故转基因植株酶 $\rm D$ 基因（用$\rm D$表示）在染色体的位置为：  。