为使人胰岛素在乳酸菌中高效表达，需改造其编码序列。下图是改造前后人胰岛素$\rm B$链编码序列的起始$\rm 30$个核苷酸序列。据图分析，转录形成的$\rm mRNA$中，该段序列所对应的片段内存在碱基替换的密码子数有                 个。

从图示可知，改造前后人胰岛素$\rm B$链编码序列的起始$\rm 30$个核苷酸序列有$\rm 7$个核苷酸发生了替换，则其转录形成的$\rm mRNA$中，也会有$\rm 7$个核苷酸发生改变，而且之间存在间隔，一个密码子由$\rm mRNA$上三个连续的碱基组成，由图可知，该段序列所对应的片段内存在碱基替换的密码子数有$\rm 6$个。

在人胰岛素$\rm A$、$\rm B$肽链编码序列间引入一段短肽编码序列，确保等比例表达$\rm A$、$\rm B$肽链。下列有关分析正确的是$\rm (\quad\ \ \ \ )$。

引入短肽编码序列不能含终止子序列

引入短肽编码序列不能含终止密码子编码序列

引入短肽不能改变$\\rm A$链氨基酸序列

引入短肽不能改变原人胰岛素抗原性

要确保等比例表达$\rm A$、$\rm B$肽链，则需$\rm A$、$\rm B$肽链一起合成，即启动子和终止子在人胰岛素$\rm A$、$\rm B$链编码序列两端，在其中间加入一段短肽编码序列后，序列中间不能出现终止子，所转录得到的$\rm mRNA$中间也不能出现终止密码子，同时不能改变肽链的氨基酸序列和它的功能，$\rm ABCD$正确。

故选：$\rm ABCD$。

在重组表达载体中，$Sac$Ⅰ和$Xba$Ⅰ限制酶仅有图示的酶切位点。用这两种酶充分酶切重组表达载体，可形成                种$\rm DNA$片段。质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有                （答出两点即可）

$\\rm 3$；①自我复制；②带有特殊的标记基因③具有一个至多个限制酶切点

在重组表达载体中，$Sac$Ⅰ和$Xba$Ⅰ限制酶切位点分别有$\rm 2$个和$\rm 1$个，当将重组表达载体用$Sac$Ⅰ和$ Xba$Ⅰ限制酶充分酶切后，会形成$\rm 3$个缺口，得到$\rm 3$种不同的$\rm DNA$片段。质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有：①自我复制；②带有特殊的标记基因；③具有一个至多个限制酶切点。

检测转化的乳酸菌发现，信号肽$\rm —$重组人胰岛素分布在细胞壁上。由此推测，信号肽的合成和运输所经历的细胞结构依次是                                                                。

核糖体、细胞质基质、细胞膜、细胞壁

乳酸菌属于原核细胞，其细胞壁上的信号肽在核糖体上合成后，到细胞质基质中加工，再将其运输到细胞膜上，进而转移到细胞壁。

Ⅰ型糖尿病也可以通过核移植技术进行治疗。目前核移植技术中普遍使用的去核方法是                 法，还有人采用梯度离心，紫外光短时间照射、化学物质处理等方法，这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核                 ，从而达到去核的目的。

目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法，还有人采用其他方法，如梯度离心，紫外光短时间照射，化学物质处理等，这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核$\rm DNA$变性，从而达到去核目的。具体的实验操作是，通过显微操作去除卵母细胞中的核，由于$\rm M$Ⅱ期卵母细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管可一并吸出细胞核与第一极体。