培养$\rm ES$时，应将$\rm ES$置于                                                                的混合气体的$\rm CO_{2}$培养箱中培养。$\rm CO_{2}$的主要作是                                                                。

$\\rm 95\\%$空气和$\\rm 5\\%$的$\\rm CO_{2}$；维持培养液的$\\rm pH$

培养$\rm ES$所需气体主要有$\rm O_{2}$和$\rm CO_{2}$，应将$\rm ES$置于$\rm 95\%$空气和$\rm 5\%$的$\rm CO_{2}$的混合气体的$\rm CO_{2}$培养箱中培养。$\rm CO_{2}$的的主要作是维持培养液的$\rm pH$，$\rm O_{2}$是细胞代谢所必需的。

提取胰腺细胞的总$\rm mRNA$，经过                 过程可获得$\rm cDNA$。为特异性的扩增$\rm Pdx1$基因的$\rm cDNA$，需要设计引物，引物与$\rm Pdx1$基因$\rm cDNA$的                 端碱基序列互补配对。为使基因表达载体能成功表达$\rm Pdx1$蛋白和绿色荧光蛋白的融合蛋白，应将                 （填“含”或“不含”）终止子的$\rm cDNA$插入到$\rm GV347$的限制酶切割位点（如下图）。

注：$\rm Tet$诱导的启动子是在四环素存在条件下，可以激活基因表达。

逆转录是以$\rm mRNA$为模板，合成$\rm DNA$的过程，提取胰腺细胞的总$\rm mRNA$，经过逆转录过程可获得$\rm cDNA$，特异性的扩增$\rm Pdx1$基因的$\rm cDNA$，需要设计引物，引物与$\rm Pdx1$基因$\rm cDNA$的$\rm 3'$端碱基序列互补配对，引物的作用是使$\rm DNA$聚合酶能够从引物的$\rm 3'$端开始连接脱氧核苷酸。$\rm Pdx1$蛋白和绿色荧光蛋白共用一个启动子和终止子，因此$\rm Pdx1$基因的$\rm cDNA$应不含终止子，否则绿色荧光蛋白基因无法表达。

将重组载体导入$\rm ES$，然后将细胞置于含有                                                                的培养基内培养，以筛选出成功导入载体的细胞。当四环素存在时，有利于                与$\rm Tet$诱导的启动子结合，驱动下游序列转录出$\rm mRNA$。可通过观察                来确定目的基因是否翻译。

嘌呤霉素（嘌呤霉素和四环素）；$\\rm RNA$聚合酶；是否发出绿色荧光

重组载体上含有嘌呤霉素抗性基因，应将细胞置于含有嘌呤霉素（嘌呤霉素和四环素）的培养基内培养，以筛选出成功导入载体的细胞。当四环素存在时，有利于$\rm RNA$聚合酶与$\rm Tet$诱导的启动子结合，驱动下游序列转录出$\rm mRNA$。由于目的基因与绿色荧光蛋白基因形成融合基因，因此可通过显微镜检测是否发出绿色荧光来反映目的基因是否翻译。

研究者检测了不同条件处理下的$\rm Pdx1$表达量（如下表所示），证明转基因细胞能定时表达$\rm Pdx1$。图$\rm 2$中①②③应分别为                 、                 、                 。

注：$\rm ES$为非转基因的胚胎干细胞；$\rm PDX1+$为转入表达载体的胚胎干细胞：“$\rm +$”越多表示表达量越高，“$\rm -$”表示未表达。

$\rm PDX1+$为转入基因表达载体的胚胎干细胞，①表达融合蛋白，①为$\rm PDX1+$，因此②为有四环素，有利于基因的表达；③为无四环素，因此组别$\rm 4$的结果无相应蛋白的表达。

为验证可通过改变四环素浓度实现对$\rm Pdx1$表达量的控制，研究者用一系列浓度梯度的四环素溶液处理$\rm PDX1+$。预期结果是                                                                。

一定浓度范围内，$\\rm Pdx1$表达量随着$\\rm Tet$浓度增加而升高

用一系列浓度梯度的四环素溶液处理$\rm PDX1+$，若一定浓度范围内，$\rm Pdx1$表达量随着$\rm Tet$浓度增加而升高，则可验证可通过改变四环素浓度实现对$\rm Pdx1$表达量的控制。