在构建基因表达载体时，需要遵循一定的规则，同时面对实际问题，利用分子生物学原理予以解决。以下有关叙述正确的是$\rm (\qquad)$

利用不同的限制酶对运载体和目的基因进行剪切而形成的黏性末端无法再次连接

如果目的基因没有合适的酶切位点，可以在引物$\\rm 3$’端末尾设计加入酶切位点，再通过$\\rm PCR$进行扩增

运载体中若标记基因中存在酶切位点，那么在重组$\\rm DNA$分子中该标记基因不能发挥出筛选效果

表达载体中标记基因和目的基因都需要合适的启动子，一般标记基因持续表达，目的基因可选择性表达

1、限制酶能够识别双链$\rm DNA$分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端或平末端；

2、基因表达载体的组成$\rm :$目的基因$\rm +$启动子$\rm +$终止子$\rm +$标记基因

（1）启动子在基因的首段，它是$\rm RNA$聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；

（2）终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；

（3）标记基因便于目的基因的鉴定和筛选；

（4）在构建基因表达载体时，首先会用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口；然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的$\rm DNA$片段；再利用$\rm DNA$连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，这样就形成了一个重组$\rm DNA$分子。

$\rm A$、同尾酶识别的核苷酸序列不同，但是产生的末端相同，因此用同尾酶切割运载体和目的基因，可以产生相同的黏性末端而进行互补再次连接，$\rm A$错误；

$\rm B$、由于$\rm DNA$子链延伸时总是从$\rm 5$’到$\rm 3$’，如果目的基因没有合适的酶切位点，那么可以在引物$\rm 5$’端末尾设计加入酶切位点，再通过$\rm PCR$进行扩增，$\rm B$错误；

$\rm C$、运载体中若标记基因中存在酶切位点，那么经过限制酶酶切后标记基因会被破坏，因此在重组$\rm DNA$分子中该标记基因不能发挥作用，$\rm C$正确；

$\rm D$、表达载体中标记基因和目的基因都需要合适的启动子，由于细胞分化，一般标记基因和目的基因都会选择性表达，$\rm D$错误。

故选：$\rm C$。