用$\rm N$蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠脾组织用                方法或                酶处理，制成细胞悬液，置于含有                                                                气体的$\rm CO_{2}$培养箱中培养，离心收集小鼠的$\rm B$淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。

机械；胰蛋白酶、胶原蛋白；$\\rm 95\\%$的空气和$\\rm 5\\%$的$\\rm CO_{2}$

制备细胞悬液可以采用机械的方法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理，动物细胞培养要放置于$\rm 95\%$的空气和$\rm 5\%$的$\rm CO_{2}$的$\rm CO_{2}$培养箱中培养。

用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到$\rm 96$孔板，进行                 培养。用                 技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生$\rm N$蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集                 ，提取单克隆抗体。

用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到$\rm 96$孔板，每个孔尽量只接种一个杂交细胞，进行克隆化培养，利用抗原$\rm —$抗体杂交法筛选，经体外扩大培养，收集细胞培养液，提取单克隆抗体。

利用上述流程制备的$\rm N$蛋白胞外段抗体能准确识别                 的细微差异，与之发生特异性结合，并可                 ，因此被广泛用作诊断试剂。

单克隆抗体具有准确性强、灵敏度高的特点，能够准确识别抗原直接的细微差距，$\rm N$蛋白胞外段抗体能够识别相应的抗原，与之发生特异性结合，并可大量制备，因此被广泛用作诊断试剂。