从$\rm HSV1$中分离$\rm a^\prime$时，将人工合成的含特定序列的核酸探针与含有目的序列的酶解片段进行                 ，根据阳性信号逐步筛选出尽可能短的$\rm a^\prime$所在片段。

人工合成的含特定序列的核酸探针与含有目的序列的酶解片段能够碱基互补配对，进行杂交，根据阳性结果即可筛选出$\rm a$所在片段。

构建质粒$\rm pHSL$时，过程②需要用限制酶                处理质粒$\rm pHSV$和质粒$\rm pSK$，处理后的产物经鉴定、纯化后用                酶连接。结合本题，说出选择限制酶的方法：                                                                

$Bam\\rm H$Ⅰ和$Sal$Ⅰ；$\\rm DNA$连接；①不能破坏目的基因；②不破坏所有的（需要的）标记基因；③切点在启动子和终止子之间；④要用同$\\rm 2$种限制酶等，且本题中是将目的基因插入$\\rm LacZ$基因和青霉素基因之间。

质粒$\rm pSK$的$\rm a'$片段两端有$Bam\rm H$Ⅰ和$Sal$Ⅰ两种限制酶，且质粒$\rm pHSV$的$\rm LaZ$基因内部有$Eco\rm R$Ⅰ，所以不能选$Eco\rm R$限制酶，且$Hin\rm d$Ⅲ两端有目的基因和启动子等，也不能选。所以只能选择$Bam\rm H$Ⅰ和$Sal$Ⅰ两种限制酶。$\rm DNA$连接酶可以连接两个$\rm DNA$片段。选择限制酶的方法①不能破坏目的基因；②不破坏所有的（需要的）标记基因；③切点在启动子和终止子之间；④要用同$\rm 2$种限制酶等，且本题中是将目的基因插入$\rm LacZ$基因和青霉素基因之间。

步骤③将质粒$\rm pHSL$导入大肠杆菌是因为质粒$\rm pHSL$中含有                                                                ，能在大肠杆菌细胞内复制而获得大量拷贝。

大肠杆菌复制原点

能在大肠杆菌细胞内复制而获得大量拷贝，说明基因表达载体能够在受体细胞中稳定存在且复制，所以质粒$\rm pHSL$中含有大肠杆菌复制原点。

$\rm Vero$细胞系是从非洲绿猴的肾脏上皮细胞中分离培养出来的。进行$\rm Vero$细胞培养时，通常采用添加了                 等天然成分的基本培养基提供营养。

动物细胞培养所用的培养基的成分与体内细胞基本相同，如需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清或血浆，还有适量的抗生素以保证无菌环境。

$\rm tsK$株是具有感染性的$\rm HSV1$温度敏感株。在$\rm tsK$株的辅助下，$\rm pHSL$能组装成不含完整病毒基因组的颗粒（假病毒），获得含假病毒和$\rm tsK$株的混合毒株。图$\rm 2$是$\rm Vero$细胞连续传代过程中，混合毒株的滴度变化曲线及每代中假病毒所占的比例（柱形图）。据图分析，应选用                 代混合毒株用于后续神经细胞的接种实验。

$\rm P6$代混合病毒中$\rm tsK$株滴度最低，假病毒颗粒的比例最高，尽量减少$\rm tsK$株可能造成的细胞毒性，所以选用$\rm P6$代。

为验证假病毒能否感染体外培养的神经细胞并表达$\rm Laz$基因，科研人员将混合毒株与大鼠神经细胞按一定比例在                 $\rm ^\circ\rm C$下混合培养$\rm 48\;\rm h$，用含                 的检测液原位检测$\rm \beta$半乳糖苷酶的活性，结果发现大约$\rm 20\%$的细胞变蓝，说明假病毒                 （能$\rm /$不能）感染神经细胞，将外源基因$\rm Laz$导入并表达。

动物细胞培养适宜温度在$\rm 37^\circ\rm C$，$\rm Xgal$会被$\rm B$半乳糖甘酶水解成蓝色物质，进而检测其活性。结果发现大约$\rm 20\%$的细胞变蓝，说明假病毒能感染神经细胞，将外源基因$\rm Laz$导入并表达。

做实验分析题的一般思路是什么？                                                                

①先找出实验目的；②分析确定实验的自变量和因变量；③分析实验结果：曲线图、柱形图看准横纵坐标；④结合图示和所学知识分析解答

做实验分析题的一般思路是①先找出实验目的；②分析确定实验的自变量和因变量；③分析实验结果：曲线图、柱形图看准横纵坐标；④结合图示和所学知识分析解答。