实验所用载体的部分结构及其限制酶识别位点如图$\rm 1$所示。其中$\rm GtP$为启动子，若使$\rm r2HN$仅在水稻胚乳表达，$\rm GtP$应为                启动子。$\rm Nos$为终止子。$\rm r2HN$基因内部不含载体的限制酶识别位点，因此，可选择限制酶                                                                对$\rm r2HN$基因与载体进行酶切，用于表达载体的构建。

水稻胚乳细胞；$Hin\\rm d$Ⅲ和$Eco\\rm R$Ⅰ

利用水稻细胞培育能表达$\rm r2HN$的水稻胚乳细胞生物反应器，在胚乳中特异性表达的启动子在水稻胚乳细胞中更容易被$\rm RNA$聚合酶识别和结合而驱动转录。$\rm Nos$为终止子，终止子可以终止转录。$\rm r2HN$基因内部不含载体的限制酶识别位点。$Kpn$Ⅰ破坏了启动子序列不能选用，$Sac$Ⅰ位于终止子序列之外不能选用，则为了将目的基因插入到载体的启动子和终止子之间，则需要用限制酶$Hin\rm d$Ⅲ和$Eco\rm R$Ⅰ对$\rm r2HN$基因与载体进行酶切，用于表达载体的构建。

在$\rm PCR$扩增$\rm r2HN$基因时，通常会在所用引物的一端添加被限制酶识别的序列，该序列添加的位置位于引物的                 （选填“$\rm 3'$端”或“$\rm 5'$端”）。如图$\rm 2$所示，在$\rm R1$上添加的序列为                  限制酶的识别序列。

在$\rm PCR$扩增$\rm r2HN$基因时，通常会在所用引物的一端添加被限制酶识别的序列，该序列添加的位置位于引物的$\rm 5'$端。在$\rm R1$上添加的序列为$Hin\rm d$Ⅲ限制酶的识别序列。

利用                方法将$\rm r2HN$基因导入水稻愈伤组织。为检测$\rm r2HN$表达情况，可通过$\rm PCR$技术检测                                                                。

农杆菌转化；$\\rm r2HN$ $\\rm mRNA$

利用农杆菌转化方法将$\rm r2HN$基因导入水稻愈伤组织。为检测$\rm r2HN$表达情况，可通过$\rm PCR$技术检测$\rm r2HN$ $\rm mRNA$。

获得转基因植株后，通常选择单一位点插入目的基因的植株进行研究。此类植株自交一代后，$\rm r2HN$纯合体植株的占比为                 。

获得转基因植株后，通常选择单一位点插入目的基因的植株进行研究。单一位点插入目的基因的植株，则相当于杂合子，杂合子自交，后代含有$\rm r2HN$基因的纯合子为$\rm \dfrac14$。