途径$\rm I$和Ⅱ需将全病毒接种到动物细胞中，才能获得所需产品。进行动物细胞培养时，需提供适宜的                                ，且培养液需定期更换，目的是                                                                。

温度、$\\rm pH$和渗透压；清除代谢废物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害

进行动物细胞培养时，需提供适宜的营养、温度和$\rm pH$、气体环境、无菌无毒环境等条件。营养方面，需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分；温度一般与动物体温相近，哺乳动物多以$\rm 36.5±0.5^\circ\rm C$为宜；$\rm pH$一般为$\rm 7.2\sim 7.4$；气体环境主要是$\rm O_{2}$和$\rm CO_{2}$，$\rm O_{2}$是细胞代谢所必需的，$\rm CO_{2}$的主要作用是维持培养液的$\rm pH$；同时要保证无菌无毒环境，防止微生物污染和有害代谢产物积累对细胞造成伤害。培养液需定期更换，目的是清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，同时也能为细胞补充营养物质；

途径Ⅲ中，①过程需要的原料是                 。过程④一般先用$\rm \text{C}{{\text{a}}^{2+}}$处理工程菌，使细胞处于一种                                                                的生理状态，再将重组的基因表达载体导入其中。发酵罐内的发酵是过程⑤⑥的中心环节，需要随时检测培养液中的微生物数量以了解发酵进程。实验室中通常可采用                                                                这两种方法进行微生物计数。

途径Ⅲ中①过程是由$\rm RNA$合成$\rm DNA$片段，即逆转录过程，该过程需要的原料是四种脱氧核苷酸（$\rm dATP$、$\rm dTTP$、$\rm dGTP$、$\rm dCTP$ ）。过程④是将重组的基因表达载体导入工程菌，一般先用$\rm Ca$²$\rm ^{+}$处理工程菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中$\rm DNA$分子的生理状态，这种状态被称为感受态。实验室中通常可采用稀释涂布平板法和显微镜直接计数法这两种方法进行微生物计数。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，在适宜条件下培养，通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数；显微镜直接计数法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量；

途径Ⅳ仅将编码病毒某蛋白的基因重组到真核表达载体中制成$\rm DNA$疫苗，而非将病毒整个基因组制成疫苗，这样做的优点是                                                                。

比较安全，特异性强$\\rm ($既能够产生相应的抗原刺激免疫系统，又不会产生完整的病 原体造成危害$\\rm )$

途径Ⅳ仅将编码病毒某蛋白的基因重组到真核表达载体中制成$\rm DNA$疫苗，而非将病毒整个基因组制成疫苗，这样做的优点是$\rm DNA$疫苗只含有病毒的抗原基因，比较安全，特异性强$\rm ($既能够产生相应的抗原刺激免疫系统，又不会产生完整的病 原体造成危害$\rm )$。