图中获取目的基因采用的限制酶是$Bam\rm H$Ⅰ和$Bgl$Ⅱ，但是处理后的目的基因后并不能避免自身环化，原因是                                                                。处理质粒应采用的限制酶是                。

两种酶处理目的基因得到的黏性末端相同；$Bam\\rm H$Ⅰ

据图分析，限制酶$ Bam\rm H$Ⅰ和$Bgl$Ⅱ处理目的基因后得到的黏性末端相同，均为$\rm -GATC$，故不能避免目的基因的自身环化。目的基因应插入质粒的启动子和终止子之间，故处理质粒应采用限制酶$Bam\rm H$Ⅰ。

图中$\rm PCR$扩增时引物的作用是                                                                。基因工程的核心环节是图中的                （填标号）。

使$\\rm DNA$聚合酶能够从引物的$\\rm 3'$端开始连接脱氧核苷酸；①

引物的作用是使$\rm DNA$聚合酶能够从引物的$\rm 3'$端开始连接脱氧核苷酸。①构建基因表达载体是基因工程的核心环节。

③为使两细胞融合，常用的物理方法是                 ，④为激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程，常用的物理方法是                 。

两细胞融合常用的物理方法是电融合法；使重构胚完成细胞分裂和发育进程，常用的物理方法是电刺激。

如果要一次性获得更多的转基因猪，可在囊胚期对早期胚胎进行胚胎分割，操作时要注意                                                                。获得的转基因猪中的$\rm manA$主要在                中进行表达。

将囊胚的内细胞团均等分割；消化腺细胞

进行胚胎分割时要注意将囊胚的内细胞团均等分割，转多聚糖酶在消化道内分解多聚糖类物质，故获得转基因猪中的$\rm manA$主要在消化腺细胞中进行表达。