采集有病斑的水稻叶片，经表面消毒、研磨处理，制备研磨液。此后，采用                （填方法）将研磨液接种于不同的选择培养基，分别置于不同温度下培养，目的是                                                                。

稀释涂布平板法；分离不同条件下生长的内生放线菌

从含有多种微生物的研磨液中分离出单一菌落，并接种到选择培养基中常用的接种方法是稀释涂布平板法。使用选择培养基和不同的温度条件，目的是为了抑制其他杂菌的生长，分离不同条件下生长的内生放线菌。

经筛选获得一株内生放线菌，该菌株高效合成铁载体小分子，能辅助内生放线菌吸收铁离子。$\rm R$基因是合成铁载体的关键基因之一。科研小组构建$\rm R$基因敲除株，探究铁载体的功能。主要步骤如下：首先克隆$\rm R$基因的上游片段$\rm R-U$和下游片段$\rm R-D$；然后构建重组质粒；最后利用重组质粒和内生放线菌$\rm DNA$片段中同源区段可发生交换的原理，对目标基因进行敲除。如图$\rm 1$所示。

采用$\rm PCR$技术鉴定$\rm R$基因的敲除结果。$\rm PCR$通过变性、复性和延伸三步，反复循环，可实现基因片段的                。$\rm R$基因敲除过程中，可发生多种形式的同源区段交换，$\rm PCR$检测结果如图$\rm 2$所示，其中$\rm R$基因敲除株为菌落                （填序号），出现菌落④的可能原因是                                                                。

指数级扩增；②；重组质粒通过（单交换）同源重组整合到了内生放线菌的基因组中

$\rm PCR$技术的核心原理是通过多次循环（变性、复性、延伸），使目标$\rm DNA$片段的数量以指数形式快速增加，实现体外扩增。$\rm PCR$鉴定是利用引物$\rm 1$和引物$\rm 2$进行的。 在野生型菌株中，引物$\rm 1$和引物$\rm 2$之间的$\rm DNA$片段长度为 $\rm R-U(500\;bp)+R$基因 $\rm (2000\;bp)+R-D(500\;bp)=3000\;bp$。对应图$\rm 2$中的菌落①和③。 在成功发生双交换的$\rm R$基因敲除株中，$\rm R$基因$\rm (2000\;bp)$被替换，引物$\rm 1$和引物$\rm 2$之间的$\rm DNA$片段长度为 $\rm R-U(500\;bp)+R-D(500\;bp)=1000\;bp$。对应图$\rm 2$中的菌落②。 菌落④的$\rm PCR$产物大小约为$\rm 7000\;bp$。这个大小可以通过以下方式解释：发生了单交换同源重组事件。整个重组质粒（大小为$\rm 3000\;bp$质粒骨架 $\rm +500\;bpR-U+500\;bpR-D=4000\;bp$）整合到了基因组中。整合后，引物$\rm 1$和引物$\rm 2$之间的区域长度变为原来的长度$\rm (3000\;bp)$加上整个质粒的长度$\rm (4000\;bp)$，即 $\rm 3000+4000=7000\;bp$。因此，这是单交换同源重组整合的结果。

内生放线菌和稻瘟病致病菌的生长均需要铁元素。科研小组推测该内生放线菌通过对铁离子的竞争性利用，从而抑制稻瘟病致病菌生长。设计实验验证该推测，简要写出实验思路                                                                。

设置两组培养实验：对照组在低（或常规）铁浓度的培养基上进行，实验组在高铁浓度的培养基上进行。在两组培养基的相同位置分别接种内生放线菌和稻瘟病致病菌。在相同且适宜的条件下培养一段时间后，观察并比较两组中稻瘟病致病菌菌落的生长情况（如菌落大小或抑制圈大小）。若高铁组的抑制效果明显弱于低铁组，则支持该推测。

设置两组培养实验：一组为对照组，在常规（或低铁）浓度的培养基上进行；另一组为实验组，在添加了足量铁离子的培养基上进行。在两组培养基的相同位置分别接种内生放线菌和稻瘟病致病菌。在相同且适宜的条件下培养一段时间后，观察并比较两组中稻瘟病致病菌菌落的生长情况（如菌落大小或抑制圈大小）。预期结果与结论： 如果实验组（高铁培养基）中内生放线菌对稻瘟病致病菌的抑制作用明显减弱或消失，而对照组（低铁培养基）中抑制作用明显，则说明该内生放线菌是通过竞争铁离子来抑制稻瘟病致病菌生长的。