$\rm PCR$扩增目的基因时，需要模板$\rm DNA$、引物、                                                                、含$\rm Mg^{2+}$的缓冲液和耐高温的$\rm DNA$聚合酶。$\rm DNA$聚合酶在$\rm PCR$的                步骤中起作用。

$\\rm 4$种脱氧核苷酸；延伸

$\rm PCR$扩增目的基因时，需要模板$\rm DNA$、引物、$\rm 4$种脱氧核苷酸、含$\rm Mg^{2+}$的缓冲液和耐高温的$\rm DNA$聚合酶。$\rm PCR$一般分为变性、复性和延伸三步，其中$\rm DNA$聚合酶在$\rm PCR$的延伸步骤中起作用。

图中标识了载体和$\rm S$基因中限制酶的切割位点。为将$\rm S$基因正确插入载体，$\rm PCR$扩增$\rm S$基因时需在引物的                （填“$\rm 5'$端”或“$\rm 3'$端”）添加限制酶识别序列，结合上表分析，上游引物应添加的碱基序列是$\rm 5'-$                                                                $\rm -3'$，切割载体时应选用的两种限制酶是                ，$\rm PCR$扩增产物和载体分别被限制酶切割后，经纯化和连接，获得含$\rm S$基因的表达载体并导入农杆菌。

$\\rm 5'$端；$\\rm AGATCT$；$Bam\\rm H$Ⅰ、$Eco\\rm R$Ⅰ

为了使目的基因能够被限制酶切割，扩增目的基因时，需要在引物的$\rm 5'$端添加限制酶的识别序列。结合图表分析，在载体的启动子和终止子之间有$Bam\rm H$Ⅰ、$Eco\rm R$Ⅰ和$Xba$Ⅰ的识别序列，而$\rm S$基因内部含有$Xba$Ⅰ、$Nde$Ⅰ和$Bam\rm H$Ⅰ的识别序列，要用$Bam\rm H$Ⅰ、$Eco\rm R$ Ⅰ或$Xba$Ⅰ切割载体，又不能用$Xba$Ⅰ、$Nde$Ⅰ或$Bam\rm H$Ⅰ切割$\rm S$基因，再根据各种限制酶的识别序列及切割位点，可知，需要用$Bam\rm H$Ⅰ、$Eco\rm R$Ⅰ切割载体，用$Bam\rm H$Ⅰ的同尾酶$Bgl$Ⅱ和$Eco\rm R$Ⅰ切割$\rm S$基因，故$\rm PCR$扩增$\rm S$基因时需在上游引物添加的碱基序列是$\rm 5'-AGATCT-3'$。

用携带$\rm S$基因的农杆菌侵染栽培马铃薯愈伤组织时，基因表达载体中$\rm T-DNA$进入愈伤组织细胞，将$\rm S$基因整合到                                                                ，抗性基因                可用于筛选成功转化的愈伤组织。该愈伤组织经                形成芽、根，继续培育可获得抗寒能力显著增强的马铃薯植株。

栽培马铃薯愈伤组织细胞的染色体上；$\\rm 2$；再分化

$\rm T-DNA$属于可转移$\rm DNA$，用携带$\rm S$基因的农杆菌侵染栽培马铃薯愈伤组织时，基因表达载体中$\rm T-DNA$进入愈伤组织细胞，将$\rm S$基因整合到栽培马铃薯愈伤组织细胞的染色体上，抗性基因$\rm 1$位于$\rm T-DNA$外部，用于筛选含有重组载体的农杆菌，而抗性基因$\rm 2$位于$\rm T-DNA$内部，可用于筛选成功转化的愈伤组织。该愈伤组织经再分化形成芽、根，继续培育可获得抗寒能力显著增强的马铃薯植株。