利用$\rm PCR$获取目的基因，提取青稞细胞的$\rm mRNA$，经                 过程获得$\rm PCR$所需的模板。扩增$\rm Dhm4$时应选择的引物组合是                 ，为使扩增后的产物按照正确方向与质粒连接，需在两个引物的                 （填“$\rm 5$'”或“$\rm 3$'”）末端添加限制酶                 的识别序列。

青稞细胞中的$\rm mRNA$经过逆转录可获得$\rm cDNA$。

引物能使$\rm DNA$聚合酶从引物的$\rm 3$'端开始连接脱氧核苷酸，故应选择引物方向是从$\rm 5$'$\rm →3$'延伸，即引物Ⅱ和引物Ⅲ。

限制酶序列应添加在基因的外侧，不影响基因的序列，故添加在$\rm 5$'端。因为$\rm B$链为模板链，转录的方向是沿着模板链的$\rm 3$'$\rm →5$'，应将$\rm Dhn4$基因的左端与启动子一侧连接，又因为目的基因中含有$Pst$Ⅰ的识别序列，不能选用，故添加的限制酶序列分别是$Kpn$ Ⅰ和$ Xho$ Ⅰ。

图$\rm 2$所示的质粒为农杆菌的                质粒，其中启动子的作用是                                                                                  。

$\\rm Ti$；$\\rm RNA$聚合酶识别与结合的部位，使转录开始

图$\rm 2$所示的质粒为农杆菌的$\rm Ti$质粒，其中启动子的作用是$\rm RNA$聚合酶识别与结合的部位，使转录开始。

将重组质粒导入用                 处理过的农杆菌内，然后在含                 的培养基上筛选农杆菌，再将筛选后的农杆菌与草莓叶片共培养。$\rm 1$

农杆菌是原核生物，需要$\rm Ca^{2+}$处理，使其处于易于吸收外源$\rm DNA$的状态，完成将基因表达载体导入受体细胞的过程。其中基因表达载体上的$\rm amp^{r}$基因为氨苄青霉素抗性基因，属于标记基因，故可在含氨苄青霉素的培养基上培养、筛选农杆菌，再将阳性农杆菌与草莓叶片共培养，完成转化实验。

通过$\rm PCR$技术检测草莓染色体上是否插入了$\rm Dhn4$基因或                                                  ；然后通过                处理草莓，从个体水平鉴定转基因是否成功。

$\\rm Dhn4$基因是否转录出$\\rm mRNA$；低温

通过$\rm PCR$技术检测草莓染色体上是否插入了$\rm Dhn4$基因或$\rm Dhn4$基因是否转录出$\rm mRNA$；然后通过低温处理草莓，从个体水平鉴定转基因是否成功。