根据图示，该过程中获取目的基因最好使用的限制性内切核酸酶是                 。

为了酶切目的基因，可以选择$ BamH$ Ⅰ和$EcoR$Ⅰ、$\rm BamH$Ⅰ和$EcoR$$\rm V$、$EcoR$Ⅰ和$EcoR$$\rm V$这些两种酶组合，为了酶切质粒载体，可以选择$ BamH$Ⅰ和$EcoR$Ⅰ，不能含有$ EcoR$ $\rm V$，否则会破坏青霉素抗性基因，影响筛选，因此该过程中获取目的基因最好使用的限制性内切核酸酶是$BamH$Ⅰ和$ EcoR$Ⅰ。

过程②需要先将大肠杆菌用                处理，目的是                                                  。

$\\rm Ca^{2+}$；使其处于感受态（处于一种能吸收周围环境中$\\rm DNA$分子的生理状态）

过程②是将目的基因转入受体细胞，需要用$\rm Ca^{2+}$处理使其处于感受态，即处于一种能吸收周围环境中$\rm DNA$分子的生理状态。

筛选转基因成功的大肠杆菌，需要在培养基中加入                 和                 ，如果出现                 菌落，说明基因表达载体成功转入大肠杆菌。

转基因成功的大肠杆菌内含有青霉素抗性基因且$\rm lacZ$基因被破坏，因此需要在培养基中加入青霉素和$X-gal$；无$\rm lacZ$基因，则菌落呈白色，有青霉素抗性基因，则在含青霉素的培养基中能存活，因此若出现白色菌落，则说明基因表达载体成功转入大肠杆菌。

基因工程的核心步骤是                 。为了满足应用需要，在人工构建基因表达载体时构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以                 目的基因的表达。

基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。启动子是$\rm RNA$聚合酶识别与结合的部位，可用于驱动基因转录，在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时可以激活或抑制目的基因的表达。