将等量的纯化$\rm PD-1$蛋白分别注射到$\rm 4$只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗$\rm PD-1$抗体的免疫效果。实验中常用半抑制浓度（$\rm IC_{50}$）评价抗体灵敏度：即取同样浓度的不同来源抗体，分别检测一半抗体被同一种抗原结合时所需抗原的最低浓度。下图为$\rm 4$只小鼠的血清抗体相对浓度和$\rm IC_{50}$值。

据图分析，制备抗$\rm PD-1$单克隆抗体时应选择                号小鼠用作细胞融合的供体，依据是                                                  。取对应小鼠的脾脏细胞用                试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。

Ⅳ；其抗体相对浓度较高且$\\rm IC_{50}$值最低；$\\rm PEG$

$\rm IC_{50}$低说明抗体与抗原的结合效率高，即灵敏度高，因此制备抗$\rm PD-1$单克隆抗体时应选择Ⅳ号小鼠用作细胞融合的供体，依据是其抗体相对浓度较高且$\rm IC_{50}$值最低。诱导动物细胞融合应选择$\rm PEG$（聚乙二醇）。

一段时间后，将（$\rm 1$）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如下图。

①在检测时需要将$\rm PD-1$蛋白固定于载体表面制成固相抗原，并加入多孔板培养槽中的                （填“细胞”或“上清液”），待充分反应后洗脱。

②加入酶标抗体，一段时间后需要用洗脱液将未与                结合的酶标抗体洗去。

③加入相应酶促反应底物显色后，颜色越深代表                                  。

上清液；抗$\\rm PD-1$抗体；抗$\\rm PD-1$抗体含量越高

①在检测时需要将$\rm PD-1$蛋白固定于固相载体表面制成固相抗原，并加入多孔板培养槽中的“上清液”（其中含有是相应的抗体），即待测样本。

②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与抗$\rm PD-1$抗体结合的酶标抗体洗去，在载体上留下的是带有酶标抗体的抗原$\rm -$抗体复合物。

③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表抗$\rm PD-1$抗体的量，颜色越深说明待测样液中抗体含量越多。

选择抗体检测阳性且产量较高的杂交瘤细胞，可注射入小鼠腹腔，从                 中提取、分离抗$\rm PD-1$抗体。

若将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔中，则应从腹水中提取。